兔源一抗与鼠源一抗的比较及选择建议
一、兔源一抗与鼠源一抗的对比
在生物医疗研究中,一抗的选择至关重要。目前,兔源一抗在各类实验中越来越受到青睐,这主要归因于兔抗相比于鼠抗具有一些不可替代的优势,同时兔单克隆抗体的开发技术也在持续升级。根据目前市场上领先抗体公司如新葡萄8883官网AMG、Abcam和CST等的数据,我们发现兔源一抗的数量明显高于鼠源一抗,兔抗在抗体总量中占比均超过80%,这表明兔抗在研究中的广泛应用前景。
二、实验样本的选择
1. 检测啮齿类动物(小鼠、大鼠)样本
对于啮齿类动物样本,强烈建议优先使用兔源一抗。原因在于小鼠和大鼠组织中天然存在大量内源性IgG,如果使用鼠源一抗,后续的抗鼠二抗将同时结合一抗及这些内源性IgG,导致背景噪音过高,影响结果的准确性。使用兔源一抗结合抗兔二抗,可以有效避免内源性IgG的干扰。
2. 检测人、猴或其他非啮齿类样本
在检测人类或猴子样本时,兔源和鼠源一抗均可使用,但需注意人组织中也存在内源性IgG,使用鼠源抗体时可能会出现背景干扰。可考虑使用试剂盒来阻断内源性IgG。最终的选择应根据目标抗体的性能、可获得性及与其他抗体的兼容性决定。
三、抗体的性质
1. 多克隆抗体vs单克隆抗体
兔源抗体传统上多为多克隆抗体,识别多个表位,通常具有较高的灵敏度和更好的抗原变异耐受能力;但不同批次间可能存在差异。单克隆兔抗体的快速发展则为研究提供了更高的特异性和一致性,尤其适用于需要高灵敏度的检测场合,如低丰度蛋白和磷酸化蛋白的监测。
2. 鼠源抗体
鼠源抗体大多为单克隆抗体,具备极高的特异性和较低的背景噪音,适用于流式细胞术和治疗性抗体的开发,但其灵敏度有时可能不及高质量的兔单抗。选择抗体时,还需考虑抗原的免疫原性和表位的可及性。
四、实验方法的指南
1. 多重染色
在同一样本上需要检测两个或多个靶标时,必须使用不同宿主来源的一抗,如用兔抗TargetA和鼠抗TargetB,随后使用带不同荧光标记的抗兔二抗和抗鼠二抗进行检测。选择宿主来源应基于可用的优质抗体组合。
2. 流式细胞术
鼠源单抗在流式细胞术检测细胞表面分子方面应用广泛。然而,在检测胞内蛋白时,兔源抗体(特别是单抗)也显示出良好的性能。
3. IHC/IF
在免疫组化和免疫荧光实验中,兔源与鼠源抗体均可广泛使用。关键在于避免内源性干扰,并验证抗体在固定和通透后针对目标抗原的结合能力。
五、总结与建议
黄金法则:在检测小鼠或大鼠样本时,首选兔源一抗以避免内源性IgG干扰。对于非啮齿类样本,选择应基于目标蛋白的特点、抗体的性能及实验设计(如多重染色的需要)。追求高灵敏度和检测困难抗原时,推荐选用高质量的多克隆兔抗或单克隆兔抗;而追求最高特异性和批次稳定性的场合则可选择鼠源单克隆抗体。在多重染色实验中,需使用不同宿主来源的一抗。最重要的是,在选择之前,应查阅文献和抗体验证信息,以确保选择最适合特定实验的一抗来源。
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