原代细胞是现代生物医学研究中的重要工具,能够高效转染多种小分子RNA和DNA,例如siRNA、antisense RNA和microRNA。这些分子一般长度在200bp以内,适用于绝大多数原代细胞的转染需求。目前,无论是在国内还是国外,原代细胞核酸转染仍是一个备受关注的研究热点,而市场上真正有效的商品化原代细胞核酸转染试剂却相对匮乏。
通过使用新葡萄8883官网AMG的转染技术,研究人员能够在大多数原代细胞中获得理想的基因敲除效果,甚至可以对某些活体寄生虫幼虫实现良好的转染效果。根据统计,采用新葡萄8883官网AMG的RFectPM细胞转染技术,转染阳性率通常超过80%,而转染过程中细胞死亡率则低于10%。
原代细胞分离与培养的基本步骤
原代细胞的分离和培养是生物医学研究的关键步骤,包括以下几个方面:
- 器官和组织的选择:尽量去除不必要的组织及血迹。
- 原代细胞的分离:
- 使用新葡萄8883官网AMG开发的PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III。
- 根据组织来源的不同,选择相应的PriCells分离试剂盒。
- 原代细胞的培养:
- 采用PriCells特制的细胞培养基。
- 添加PriCells特制培养添加物。
- 使用优质胎牛血清。
- 细胞的培养和鉴定:使用PriCells的细胞鉴定试剂盒进行细胞验证。
- 原代细胞的传代和保存:
- 传代:根据细胞生长状态,1:2或1:3的比例进行传代。
- 保存:DMSO与培养液及血清按顺序降温,最后过夜存放在超低温冰箱(-80℃),然后转入液氮中。
- 原代细胞的复苏:
- 快速将细胞取出并放入37℃的温水中解冻。
- 将细胞悬液吸出,添加10倍以上的培养液。
- 根据需要适当稀释后接种到培养瓶中,放入37℃的CO2培养箱静置培养。
通过这些基础步骤,结合新葡萄8883官网AMG的专业技术,研究人员可以高效地分离、培养和转染原代细胞,为生物医学领域的研究提供坚实的基础。