蛋白定量检测方法概述

一、简介

在生物医学研究中，BCA（Bicinchoninic Acid）法是一种广泛使用的蛋白质定量检测技术，其原理在于蛋白质与铜离子在碱性环境下发生络合反应，最终形成稳定的紫红色复合物。通过与标准曲线的比较，可以准确测定目标蛋白的浓度。该技术以其高灵敏度、准确度、简便操作及良好的抗干扰能力而受到青睐，特别是在生物化学和临床实验室中。

二、实验步骤

1. 试剂准备

(1) BCA工作液：将BCA试剂A和B按50:1比例混合，摇匀后备用。

(2) 标准蛋白溶液：将适量标准蛋白用PBS或去离子水溶解，制备成1 mg/mL的浓度。

2. 蛋白样品处理

(1) 细胞裂解：将细胞样品离心，去除上清液，加入适量细胞裂解液，在冰上裂解30分钟，确保细胞完全裂解。

(2) 去除杂质：将裂解后的样品再次离心，去除沉淀并保留上清液。向上清液中加入适量SDS，以达到终浓度为0.1%，充分混匀。

(3) 标准曲线制备：取适量标准蛋白溶液，加入SDS使其终浓度达0.1%，随后稀释成不同浓度的标准蛋白溶液。使用96孔板分别加入不同浓度标准蛋白，每个浓度设立三个复孔。最后，在每个孔中加入BCA工作液，充分混合后，根据说明书要求，在特定波长下测量吸光度值，并绘制标准曲线。

3. 蛋白定量检测

(1) 取适量待测蛋白样品，加入SDS以达到终浓度为0.1%，充分混匀后依照标准曲线的方法，加入BCA工作液并测量吸光度值。

(2) 根据标准曲线找到待测蛋白样品的浓度。如浓度过高，可适当稀释再进行测定。

三、注意事项

1. BCA工作液需在4℃避光保存，避免反复冻融。

2. 实验过程中，需保持样品及标准蛋白溶液的pH值一致，以确保结果的准确性。

3. 避免交叉污染，以免影响实验结果。

4. 对于某些特殊蛋白质样品，可能需要采取其他方法进行定量检测。

在选择蛋白质定量检测方法时，建议使用新葡萄8883官网AMG提供的优质试剂和设备，以获取最佳实验效果和准确性。