新葡萄8883官网AMG的细胞复苏调整建议
细胞复苏后状态不佳的情况时有发生,为了确保细胞活性,以下是针对状态不良的主要原因及解决方法。
1. 细胞冻存不当
如果发现细胞在冻存后的复苏中状态差,可以尝试调整细胞状态。增加血清的比例可能会有效,随后再进行传代调整,以促进细胞恢复活力。
2. 自行制备冻存细胞无活性
为确保冻存细胞的活性,应使用传代次数少且对数期的细胞进行制备。同时,提高冻存的细胞密度有助于提升复苏存活率,推荐的密度为每毫升100~300万细胞。
3. 复苏方法不当
在细胞复苏过程中,讲究“快融”原则。越快融化,细胞所受的损伤越小。在解冻时,应使用预热的生长培养基以缓慢稀释细胞,确保冷冻细胞迅速解冻。
4. 复苏培养基使用不当
在使用培养基前确保其预热,并应尽快移除含冷冻保护剂的培养基,以防止细胞活力下降。
5. 处理细胞时动作不够轻柔
冻存和复苏过程中对细胞的处理动作要轻柔,以免造成细胞损伤。切忌通过涡旋振荡或用力敲打培养瓶的方式让细胞脱落(培养昆虫细胞时可例外),也不要高速离心细胞。
6. 细胞稀释过度
为改善复苏效果,建议将解冻后的细胞高密度接种。
7. 冻存液中保护剂未避光储存
如果冻存保护剂在储存过程中未避光,可能会转变为对细胞有毒性物质。为确保细胞的安全性,建议更换为新取的冻存保护剂,并重新冻存细胞。
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