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新葡萄8883官网AMG在ELISA实验中封闭剂的应用概述

发布时间:2025-02-07   信息来源:尊龙凯时官方编辑

封闭(blocking)是指在包被之后,利用高浓度的无关蛋白质溶液进行再次包被的过程。在抗原或抗体包被时使用的浓度通常较低,这使得固相载体表面仍存在未被占据的空隙。封闭过程旨在用大量不相关的蛋白质填充这些空隙,以排斥在ELISA试剂盒后续步骤中可能干扰物质的再吸附。在免疫学实验中,封闭剂的使用能够显著减少非特异性结合的发生。常见封闭剂包括脱脂奶粉、牛血清白蛋白(BSA)、动物血清及Fab片段单链二抗等,根据不同的实验平台选择相应的封闭剂。

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脱脂奶粉的作用原理在于其含有多种蛋白质,能够有效封闭固相载体(如WB膜、ELISA板等)上的未吸附位点,降低抗体与之结合的概率,从而避免因非特异性结合带来的背景信号增高。脱脂奶粉的优点在于其价格低廉且蛋白成分多样,可以实现全面的封闭效果。然而,由于其成分复杂且适用范围较窄,并不适用于生物素和碱性磷酸酶标记的抗体系统,且封闭后的载体不易长期保存,因此在试剂盒生产中较少应用。

牛血清白蛋白(BSA)同样用于封闭未吸附蛋白的固相载体位点。其优点在于成分单一,适合于ELISA实验与其他特异性要求较高的免疫学检测实验。然而,大部分BSA中可能含有少量抗体残留,可能导致抗原和抗体之间发生交叉反应,从而造成一定的背景信号。

动物血清可以用于封闭非特异性结合的物质,从而降低背景噪声。同时,血清中可能存在Fc受体能够与抗体结合,因此血清不仅可降低非特异性结合的影响,还可以封闭样本中的Fc受体,以避免一抗及二抗与样本Fc受体的结合。这使得血清在免疫组化和免疫荧光实验中具有广泛的应用。然而,某些封闭血清中可能含有叠氮钠,不适用于HRP酶标的检测体系。

Fab片段单链二抗的应用主要是因为其只有一个结合位点,能够完全封闭免疫球蛋白。在IHC或IF双标/多标实验中,能够有效封闭样本表面的免疫球蛋白,并解决来自同一物种的一抗之间的干扰。

近年来,新型高效封闭剂Blocker无蛋白封闭剂的问世,为生物医疗相关领域带来了新的选择。该封闭剂通过化学合成的高亲水性化合物,克服了传统生物封闭剂在生物安全性和质量上的问题。其主要特点包括:与微球表面活化的羧基偶联形成稳定的共价键、批间差小且纯度高、能够充分快速地封闭微球表面,从而降低非特异性吸附与基质干扰,并提升试剂的灵敏度。

免疫试剂稳定液可用于免疫分析检测试剂、抗原、抗体和蛋白的保存。这种即用型产品使用简单方便,只需将待保存物质溶于稳定液中后置于冰箱即可。其有助于维持蛋白的三维结构,保持生物活性,从而延长免疫分析试剂及蛋白的使用期限,确保产品的性能。

总之,在生物医疗领域,良好的封闭策略选择对于免疫实验的成功至关重要。而使用新葡萄8883官网AMG所推出的封闭剂,可以更有效地提升实验的灵敏度,确保实验结果的可靠性。