在上一篇关于抗体基础知识的文章中,我们介绍了IgG的可变区结构域(Fab区)具备特异性识别并结合目标分子的能力,这使得抗体分子展现出作为检测试剂的潜力。然而,想要作为有效的检测试剂,抗体结合到待测分子的表面之后,还需进一步转化为光信号或电信号,以便我们的检测仪器进行准确检测。在本章节中,我们将探讨围绕抗体的常见免疫检测技术的基本原理。
免疫检测的基本原理
免疫检测的核心在于抗原-抗体的特异性结合。抗原通常是能够激活免疫系统的外来分子或病原微生物的表面分子,而抗体是由免疫系统产生的用于识别并结合抗原的蛋白质。抗原与抗体之间的结合是高度特异的,这一特性是将免疫检测技术应用于生物医疗领域的基础。
信号放大原理
在免疫检测中,抗体需具备特性使其成为有效检测试剂。抗体作为单分子蛋白,其体积通常较小,且目标分子多为不可见的小分子。因此,将结合信息转化并放大为光信号或电信号至关重要。信号放大是免疫检测的重要步骤,通过增强检测信号的强度来提高检测灵敏度。常见的信号放大方式包括色素反应、荧光信号放大和电化学信号放大等。
常见的检测标记物类型
免疫检测中,标记物是将抗原-抗体反应转化为可检测信号的关键工具。常见的检测标记物包括酶标、荧光标记、化学发光标记和电化学标记。这些标记物各有优缺点与适用场景:
- 酶标记:常用的酶标记物如辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP),通过催化底物反应生成可见色素,操作简便且灵敏度高,但对环境影响较大。
- 荧光标记:使用荧光染料如FITC、Rhodamine等标记抗体,具有高灵敏度和分辨率,但受光源干扰,需要专用设备。
- 化学发光标记:通过化学反应产生光信号,灵敏度极高且信号稳定,但检测成本较高。
- 电化学标记:通过检测电流或电压变化实现,技术较复杂,但可快速检测。
免疫检测的关键性能指标
评估免疫检测技术的关键指标包括灵敏度、特异性、准确性与重复性:
- 灵敏度:指检测方法能检测到目标抗原的最低浓度,灵敏度高的检测方法可在更低浓度下仍能有效识别目标抗原。
- 特异性:区分目标抗原与非目标物质的能力,高特异性可减少误报,降低假阳性。
- 准确性:检测结果与真实值之间的一致性,涉及对抗原的正确识别与浓度定量。
- 重复性:在相同条件下进行多次测定时的结果稳定性,高重复性能确保不同实验间的一致性。
以上是对抗体及其在免疫检测技术中应用的概述,接下来的章节我们将详述常见的免疫检测技术。此外,新葡萄8883官网AMG提供多种蛋白、抗体及Elisa检测试剂盒,覆盖众多物种(如小鼠、大鼠),满足研究需求,助您在生物医疗领域取得优异成果。